GelRed核酸染料是一種具有凝膠染色特性,并被設(shè)計(jì)為替換高毒性染色劑-溴化乙錠(EB)的紅色熒光核酸染色劑。
GelRed核酸染料既可用于前染(precast gel staining),也可用于后染(post gel staining)。通常后染比前染能夠獲得更靈敏的特性,并能排除染色劑在電泳過程中對(duì)核酸條帶分離造成任何影響的可能性。
然而,前染較后染更為簡(jiǎn)單、經(jīng)濟(jì),因?yàn)榍叭静恍枰~外的著色過程,并且燃料用量更少。因此,假如靈敏度和條帶清晰度不成問題,前染則是一選。我們強(qiáng)烈建議您嘗試兩種染色方法,以便根據(jù)您的需要選擇一選的染色方法。
使用方法:
1.膠染法(用法同EB)
(1)制膠時(shí)加入GelRed核酸染料(例如:每50mL瓊脂糖溶液中加入5μL GelRed 10,000×儲(chǔ)液,以此比例類推)。
(2)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
注意事項(xiàng):
此方法染色染料用量相對(duì)較少,500 μL染料大約可以做100塊50 mL的膠。 由于GelRed具有良好的熱穩(wěn)定性,可以在熱的瓊脂糖溶液中直接添加,而不需要等待溶液冷卻。
搖晃,振蕩或者翻轉(zhuǎn)以保證染料充分混勻。也可以選擇將GelRed儲(chǔ)液加到瓊脂糖粉末和電泳緩沖液中,然后用微波爐或其他常用方式加熱以制備瓊脂糖凝膠。
GelRed兼容所有常用的電泳緩沖溶液。 含有染料的預(yù)制凝膠溶液可以大量制備,并長期保存直到使用。 此方法不適合預(yù)制聚丙烯酰胺凝膠,對(duì)于聚丙烯酰胺凝膠請(qǐng)使用泡染法。
2.泡染法
(1)按照常規(guī)方法進(jìn)行電泳。
(2)用H2O將GelRed 10,000×儲(chǔ)液稀釋約3,300倍到0.1 M NaCl中,制成3×染色液。(例如將15μL GelRed 10,000×儲(chǔ)液和5 mL 1 M NaCl加到45 mL H2O中)。
(3)將凝膠小心地放入合適的容器中,如聚丙烯容器中,緩慢加入足量的3×染色液浸沒凝膠,室溫振蕩染色30 min左右,染色時(shí)間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同而略有不同。對(duì)于含3.5~10%丙烯酰胺的凝膠,染色時(shí)間通常介于30 min到1 h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。